SDS page

Pagina 1

LEZIONE 6 – PROTEOMICS _ 26 marzo QUIZ DOMANDA 1: cromatografia in cui la fase stazionaria è funzionalizzata con anticorpi È la IAC, Immunoaffinity chromatography DOMANDA 2 Non è vero che la principale sorgente per produrre anticorpi policlonali sono i topi, è solo un esempio messo nelle slide. Tantissimi sono prodotti da cavalli, conigli, scimpanzè… Il topo comunque è l’eletto per produrre anticorpi monoclonali per gli uomini, perché il grado di omologia è alto tra topo e uomo. DOMANDA 3 Prima di tutto scegliamo g li anticorpi monoclonali, così per avere un maggior grado di certezza di poter purificare la nostra proteina target. A prescindere dal tipo di anticorpo, inoltre, la risoluzione dipende da come l’anticorpo è attaccato alla resina. Ci sono anche altri fattori da considerare: deve essere stabile, contentere molti ligandi e avere buona capacità di flusso. Dopo aver selezionato le fasi stazionarie in base ai primi due parametri (monoclonale e attacco direzionale), scelgo tra ciò che mi rimane una fase stazionaria che contenga molti ligandi. Se scegliamo resina con elevata densità di anticorpi, aumentiamo la capacità di legame della resina stessa: in questo modo abbiamo una buona percentuale di certezza che la proteina target contenuta nel campione, in una quantità che non possiamo sapere, si legherà toltalmente alla fase stazionaria, senza andare a saturare i ligandi. La buona capacità di flusso è data piuttosto invece dalla tipologia di matrice. DOMANDA 4 B. Se l’attacco è random, il legame avviene attraverso una qualsiasi lisina. SDS-PAGE: POLYACRILAMMIDE GEL ELECTROPHORESIS L’elettroforesi si può usare come metodica per purificare il nostro estratto, separarlo in tutte le sue componenti proteiche, ma viene utilizzata nel 90% dei casi prima di un’analisi di…