Riassunto ABB Candiani Pelegatta

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– Rilevamento immunologico ∗ Metodo diretto: Abs primario + marcatore fluorescente che lega ad uno specifico Ag ∗ Metodo indiretto: Abs primario legato ad antigene al quale sono aggiunti Abs secondari che si legano da una parte all’Ab pri- mario e portano con se enzimi, che vengono convertiti tramite substrato in pigmento insolubile, oppure direttamente marca- tore fluorescente amplificando il segnale rispetto al metodo di- retto – Microscopia e data-analysis 1.16 Elenco tecniche di analisi cellule/proteine/D- NA/RNA • FCM: tecnica analitica per conoscere dimensione (FSC), complessit` a (SSC) e CD presenti in una singola cellula (analisi fluorescenza di cel- lule marcate con fluorocromo+Ab specifico Ag d’interesse). Aggiunta di F ACS (cellule caricate e flusso deviato) o funzionalizzazione delle cellule con Ab+particelle magnetiche (economico e grande scala cellulare) ! diventa tecnica preparativa • Proteine – Estrazione proteine: Detergenti (SDS anionico / carica nulla) + metodi fisici + inibitori proteasi ! ottenimento sufrattante (soluzione con proteine da studiare) – Saggio BCA (analisi quantitativa): permette di analizzare il quan- titativo proteico presente in soluzione utilizzando la legge di Beer- Lambert (calcolo concentrazione chimica in funzione dell’assorbanza di una radiazione elettromagnetica), si confronta il campione con una curva di calibrazione ottenuta diluendo a una soluzione a con- centrazione nota (curva valida solo per valori intermedi, no estremi) – Cromatografia (tecnica analitica/preparativa) ∗ Cromatografia TLC: tecnica utilizzata per separare 2 o pi` u pro- teine contenute in una soluzione in base all’a nit` a con fase stazionaria/fase mobile (fasi immiscibili) ! eluizione misurata tramite RF ∗ Cromatografia liquida su colonna: tecnica utilizzata per…