Cromatography

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LEZIONE 2 – PROTEOMICS _ 12 marzo Durante la purificazione dobbiamo in qualche modo semplificare il campione, perché non ci sono tecniche abbastanza avanzate: dobbiamo ottenere diverse frazioni, cioè diversi pool proteici accomunati da alcune caratteristiche. Queste ultime dipendono dalle tecniche di purificazione scelte e le principali sono: - Cromatografia - Elettroforesi - Entrambe: in questo caso aumenta l’efficienza, ma così anche i tempi di analisi CROMATOGRAFIA La differenza tra le varie tecniche sta nel modo in cui la cromatografia separa le proteine, perché ognuna si basa su una caratteristica chimico-fisica delle proteine per separarle. COS’E’ La cromatografia è una tecnica separativa che prevede la compresenza di due fasi: - Stazionaria: s tato solido o di gel. In base a dove si trova questa fase, ci sono diversi tipi di cromatografia:  SU COLONNA: la fase stazionaria è contenuta in una colonna  SU STRATO SOTTILE: la fase stazionaria si trova come strato su un vetrino - Mobile: soluzione liquida CROMATOGRAFIA SU COLONNA - FASE STAZIONARIA COS’E’ È un gel costituito da una matrice porosa: essa deve essere quindi sempre umida, non si dovrà seccare, altrimenti andrebbe ad inficiare le caratteristiche microscopiche di ciascun componente della fase stazionaria. Il gel è imbevuto in un’opportuna fase mobile ed è costituito da una matrice porosa di materiale polimerico, che dà appunto la porosità: i componenti hanno la possibilità di polimerizzare tra di loro e in base alla fittezza della maglia si avrà una matrice più o meno porosa. CARATTERISTICHE Ciascuna fase stazionaria deve avere le seguenti caratteristiche: - Stabilità chimico-fisica: è stabile durante tutti gli step dell’analisi cromatografica, nei confronti di tutti i tipi di fase mobile che vi…